Klinische Anwendungen und Vorteile von In

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Die Festphasenextraktion (SPE) ist eine gängige Probenvorbereitungstechnik, mit der interessierende Analyten von Matrizen getrennt werden, die häufig eine Ionensuppression verursachen. Die gängigsten SPE-Formate auf dem Markt sind Kartuschen, 96-Well-Platten, Online und QuEChERS. Mit Ausnahme des letzten Beispiels wurde SPE traditionell in einem festen Sorptionsbett hergestellt. In dieser Präsentation wird ein relativ neues Format vorgestellt: DPX (Dispersive Pipette eXtraction), die dispersive SPE in der Pipette.

DPX-Spitzen, die ein kürzlich entwickeltes polymeres HLB-Sorbens (Hydrophilic-Lipophilic Balanced) von MilliporeSigma enthalten, wurden in mehreren klinischen/toxikologischen Anwendungen in mehreren biologischen Matrizen (Urin und Serum) verwendet. Obwohl der Arbeitsablauf mit den DPX HLB-Spitzen manuell durchgeführt werden kann, wird in diesem Webinar die vollständige Automatisierbarkeit der Probenvorbereitung mithilfe von Roboter-Liquid-Handlers hervorgehoben. Die Vorteile dieser neuartigen Technologie, einschließlich Zeit- und Kosteneinsparungen, werden ebenfalls besprochen.

Als Teilnehmer erfahren Sie mehr über:

Hugh CramerWissenschaftlerMilliporeSigma

Die von Ihnen bereitgestellten Informationen werden an die Sponsoren dieses Inhalts weitergegeben. Lab Manager oder seine Sponsoren können Sie kontaktieren, um Ihnen Inhalte oder Produkte anzubieten, die auf Ihrem Interesse an diesem Thema basieren. Sie können diese Mitteilungen jederzeit abbestellen. Informationen zum Abbestellen, zu unseren Datenschutzpraktiken und unserer Verpflichtung zum Schutz Ihrer Privatsphäre finden Sie in unserer Datenschutzrichtlinie.

Hallo zusammen und willkommen zur Produkt-Spotlight-Webinarreihe für Laborleiter. Mein Name ist Mary Beth de Donna und ich werde die heutige Diskussion über klinische Anwendungen und Vorteile der in Pipettenspitzen dispersiven SPE moderieren. Wir möchten, dass unsere Webinare sehr interaktiv sind. Daher empfehlen wir Ihnen, Ihre Fragen jederzeit während des heutigen Webinars an uns zu richten. Auf diese Fragen wird unser Redner in der Frage-und-Antwort-Runde im Anschluss an seinen Vortrag eingehen. Um eine Frage zu stellen oder einen Kommentar zu hinterlassen, geben Sie einfach Ihre Anfrage in das Frage-und-Antwort-Feld auf der rechten Seite Ihres Bildschirms ein.

Wir werden versuchen, in unserer gemeinsamen Zeit so viele Fragen wie möglich zu klären. Sollte uns jedoch die Zeit ausgehen, werde ich alle unbeantworteten Fragen an unseren Referenten weiterleiten und er kann Ihnen nach Möglichkeit direkt antworten. Ich möchte Sie daran erinnern, dass diese Webinar-Aufzeichnung kurz nach dieser Präsentation auf Anfrage verfügbar sein wird. Bitte warten Sie daher auf eine E-Mail des Laborleiters und erfahren Sie, wie Sie auf dieses kostenlose Video zugreifen können, sobald es verfügbar ist.

Ein besonderer Dank gilt auch unserem Sponsor Milliporesigma. Ihre Unterstützung ermöglicht es dem Laborleiter, diese Webinare unseren Lesern kostenlos anzubieten. Damit möchte ich unseren Moderator für dieses Webinar vorstellen. Hugh Kramer verfügt über mehr als 35 Jahre Erfahrung in der Arbeit mit Anwendungen und Produkten der analytischen Chemie und Milliporesigma, einem Unternehmen der Merck KGaA, Darmstadt, Deutschland. Er begann seine Arbeit als GC-Chemiker und leitete später mehrere Jahre lang den QC-Bereich, bevor er in den Anwendungsbereich der HPLC wechselte. Forschung und Entwicklung. In den letzten Jahren lag sein Hauptaugenmerk auf der Entwicklung von HPLC- und LC-MS-Methoden zur Probenvorbereitung. Vielen Dank, dass Sie heute zu uns gekommen sind.

Das Life-Science-Geschäft der Merck KGaA Darmstadt, Deutschland, ist in den USA und Kanada als Milliporesigma tätig.

Im heutigen Webinar befassen wir uns mit dem DP X-Intercept-Format und seiner Verwendung. Dann schauen wir uns dieses Appel Swift HLB-Material an. Ich zeige ein kurzes Video, das den Tipp in einem automatisierten Prozess zeigt. Ich habe heute auch drei Bewerbungen beigefügt. Das erste sind Opioid-Medikamente aus dem Urin, dann Steroide aus dem Serum. Und schließlich schauen wir uns THC CBD und seine Metaboliten an, und das ist auch das DP x im Spitzenformat aus Serum. Heute möchte ich Ihnen ein innovatives Produkt vorstellen, das in Kürze das DP x in tip SPE auf den Markt bringt. DP X steht für dispersive Pipettenextraktion, eine patentierte Technologie. Sie unterscheidet sich von der herkömmlichen Festphasenextraktion dadurch, dass die Absorption nicht dicht zwischen zwei Bünden gepackt ist, sondern lose in der Spitze enthalten ist. Es funktioniert durch Ansaugen und Abgeben von Lösungen mit der Spitze. Wenn wir uns das Bild ansehen, sehen wir unten an der Spitze einen Bund, über dem sich das Absorptionsmittel befindet.

Beachten Sie auch, dass sich auf dem Weg nach oben ein blauer Dispergator befindet, der das Mischen erleichtert. Hier zeigen wir ein Acht-Kanal-Rohrmuster, das mit GPX-Spitzen beladen ist und für die Verarbeitung einer 96-Well-Platte bereit ist. Diese Abbildung zeigt einen typischen Bind-Wash-Elude-Extraktionsprozess, der bei SPE üblich ist. Bei den DP Von links nach rechts beginnen wir mit der Konditionierung. Die Konditionierungslösung wird zugeführt und abgesaugt und abgegeben. Dann gehen wir zu einem Bindungsschritt über, bei dem wir den Analyten auf dieses Absorptionsmittel laden. Der nächste Schritt ist ein Abwaschen, bei dem wir Störungen wegwaschen.

Und schließlich wird ein starkes Lösungsmittel verwendet, um den gewünschten Analyten zu eluieren. Auf den nächsten Folien gehen wir auf die Empfehlungen aus unserem Leitfaden zur Methodenentwicklung ein. Erstens ist bei unserem HLB-Material eine Konditionierung nicht immer erforderlich. Manchmal hilft es bei der Genesung. Es ist analytabhängig. Bei diesem Konditionierungsschritt handelt es sich üblicherweise um 5 bis 30 % Methanol. Wir verwenden etwa 750 Mikroliter, wenn wir eine 1-ml-Spitze verwenden, normalerweise sind Trennungen von ein bis zwei Stunden ausreichend. Um die Probe im Bindungsschritt zu laden, verwenden wir normalerweise drei oder vier Ansaug-Dispensierzyklen. Das ist normalerweise ausreichend. Wenn Sie eine wässrige, nicht viskose Probe haben, können Sie etwas mehr Luft als das Probenvolumen ansaugen.

Wenn Sie also etwa 300 Mikroliter Probe haben, können Sie Ihre Pipette auf etwa 400 Mikroliter einstellen. Und diese zusätzlichen 100 Mikroliter Luft helfen beim Mischen. Wenn Sie eine viskose Probe wie Serum oder Ölflüssigkeit haben, ist dies keine gute Idee. Bleiben Sie also einfach bei der gleichen Lautstärke wie bisher. Wir empfehlen in diesem Schritt Ihrer Lösung nur etwa 5 % Bio, um sicherzustellen, dass Sie eine ausreichende Bindung erhalten. Bei Waschzyklen zur Beseitigung von Störungen können Sie entweder eine einzelne Lösung oder eine Reihe von Lösungen im Prozess verwenden. Üblicherweise wird dazu nur zweimal eine 10 %ige Methanollösung abgesaugt. Wenn Sie die Menge erhöhen müssen, um weitere Störungen zu beseitigen, können Sie den Methanolanteil erhöhen, aber das hängt alles von der Polarität des interessierenden Analyten ab.

Zur Elution der Analyten wird eine Lösung mit hohem organischen Anteil verwendet. Diese Lösung muss mit Wasser mischbar sein, da möglicherweise noch etwas Wasser vom vorherigen Schritt übrig ist. Unser Datenblatt enthält eine Tabelle, die Elutionsvolumina basierend auf der Masse des Sorbens in der Spitze vorschlägt. Ein Vorschlag, Luft anzusaugen, wie wir es im Bindungsschritt getan haben, um die Genesung zu unterstützen, und auch bei der Genesung kann manchmal durch mehrere Illusionen von Alec Watts statt nur einer großen verbessert werden. Unsere DPS HLB-Spitzen sind in verschiedenen Formaten erhältlich.

Auf der linken Seite des Fotos ist der Mikroevolutionstipp zu sehen. Der große Vorteil der Micro-Evolution-Spitze ist ein kleineres Elutionsvolumen von nur 25 Mikrolitern. Dieser Tipp ist nur im Hamilton-Format verfügbar. Auf der rechten Seite sehen Sie die Pipettenspitze vom Typ ML. Es ist sowohl im Universal- als auch im Hamilton-Format erhältlich. Die Aleuten-Volumina dafür liegen zwischen drei und 800 Mikrolitern.

Bei einem weiteren Kommentar werden Sie feststellen, dass es einen veralteten schattierten Bereich gibt oder dass es bei der 1-ml-Größe ein wenig wie die Partikel oben im Röhrchen aussieht. Das ist typisch, weil das Absorptionsmittel lose in der Spitze sitzt. Zu den Unterschieden zwischen dem DP x-Format und herkömmlichem SPE gehört, dass die Lösungen beim Ansaugen und Abgeben der Pipette nicht von oben geladen werden. Dadurch basiert die Funktion auf dem Gleichgewicht statt auf der Durchflussrate. Das lose Sorptionsmittel ermöglicht einen maximalen Oberflächenkontakt und erhöht die Geschwindigkeit. Ich zähle diese als fragwürdige Vorteile auf, weil wir alle wissen, dass ESPYS eine großartige Technik ist. Es gibt viele Möglichkeiten, die darin verwendet werden. Aber wir sehen höhere Kontakt- und Mischgeschwindigkeiten mit dem DP x, hohe Analytrückgewinnung, hohen Durchsatz, schnelle Extraktionszeiten, hohe Reproduzierbarkeit und Automatisierungskompatibilität.

Im nächsten Abschnitt werden wir uns mit dem Material befassen, das wir in diese Tipps packen. In diesem Fall handelt es sich um das Zauberschnell-HLB-Material. Spell Swift HLB-Material ist eine polymere stationäre Phase. Das ATL B steht für Hydrophilic und Lipophilic Balanced. Die Struktur enthält sowohl hydrophile als auch lipophile funktionelle Gruppen, die bei der Extraktion einer breiten Palette von Verbindungen aus wässrigen Proben helfen. In dieser Tabelle sind die Merkmale und Vorteile des HLB-Materials aufgeführt.

Auch hier haben wir das Gefühl, dass das breite Spektrum an Analyten von POLAR UNPOLAR sauer bis basisch und die größere Kapazität zu geringeren Bettgewichten und geringeren Elutionsvolumina führt. Das hilft bei der Zeitersparnis bei der Probenbearbeitung. Wir listen resistente Überzeichnungen auf, die nicht auf das DP

Und wir stellen fest, dass unsere strengen Produktions-QC-Standards für Konsistenz sorgen und Genauigkeit und Präzision verbessern. Auf der nächsten Folie zeige ich ein Video, das zeigt, wie einfach die DB X-Tipps automatisiert werden können. Um Sie nicht zu langweilen, möchte ich an dieser Stelle einen kleinen Hinweis darauf geben, dass das Video mit der doppelten normalen Geschwindigkeit abgespielt wird. Und es zeigt eine Erholung von Blau aus grüner Lebensmittelfarbe. In diesem Schritt erfolgt keine Konditionierung. Hier sehen wir, wie der Roboter die GPX-Spitzen und ihr Fleisch aufnimmt und sich in die Vertiefungen mit der grünen Lebensmittelfarbe bewegt. Es zieht sie hoch, saugt sie dann einfach an und gibt sie direkt wieder in dieselben Vertiefungen ab.

Sie können sehen, dass das Blau an der Stütze unten an der Spitze geblieben ist. Wir gehen zum Waschschritt über. Ich werde eine Lösung aus 20 % Methanol aufziehen und Wasser abgeben, und jetzt können Sie den Zustand sehr gut erkennen. Sie können das Hellblau am unteren Ende der Spitze sehen, zu dem wir übergehen Aleutische Testamente, die mit 100 % Methanol gefüllt sind, saugen dieses auf, und Lichter wandern von der Halterung weiter in das Methanol und werden direkt wieder dorthin abgegeben. Das ist gut für eine spätere Analyse.

Wir beginnen den Anwendungsabschnitt mit der Extraktion von Opioid-Medikamenten aus Urin. Bei dieser Extraktion handelte es sich um 13 Opioid-Medikamente und interne Standards aus dem Urin. Sie repräsentieren eine breite Palette von Protokoll-PS. Beachten Sie, dass die ersten drei oder andere einen log p von weniger als eins haben, der für eine CA-Teamphase normalerweise schwer beizubehalten ist. Die Reinigung wurde mit den DPS-HLB-Spitzen auf dem automatischen Flüssigkeitsprobenehmer von Hamilton durchgeführt, gefolgt von LC ms ms. Analyse. Als diese spezielle Studie durchgeführt wurde, lag unser Hauptinteresse darin, die Variabilität von Spitze zu Spitze zu untersuchen.

Deshalb haben wir eine ziemlich große 20-ml-Probe vorbereitet und dann dieselbe Probe auf acht verschiedene Pipettenspitzen verteilt. Ich liste hier links die Probenvorbereitungsschritte auf, die wir manuell durchgeführt haben, bevor wir die Proben auf einen automatischen Flüssigkeitsprobenehmer von Hamilton übertragen haben, um die Extraktion durchzuführen. Zuerst kombinierten wir den Urin, etwas Phosphatpuffer der Beta-Kluk-Your-Ehren-Day-Lösung, die versetzten Analyten und ihre internen Standards. Diese Lösung wurde dann einige Stunden lang auf 60 °C erhitzt. Und das ermöglicht es dem Bakel Beta Glucan Your Honor Days-Enzym, alle Glucuronid-Metaboliten zurück zum Ausgangsarzneimittel zu hydrolysieren.

In diesem Fall wurden die Spitzen konditioniert, wir verwendeten die 5 %ige Methanollösung, wir aspirierten viermal im Bindungsschritt und wuschen erneut mit 5 %iger Methanollösung. Und dann wurde die Lösung mit einer 5 %-igen Ameisensäure-in-Methanol-Lösung durchgeführt und wir haben zweimal abgesaugt und dispensiert, um gute Rückgewinnungen zu erzielen. Die Proben wurden dann mit 100 und 150 Mikroliter verdünnt, die Lösung wurde dann mit 350 Mikroliter Wasser verdünnt, bevor sie mittels LCMS analysiert wurde. Diese Folie zeigt die Bedingungen, die für die LCMS-Analyse der Proben verwendet wurden.

Die überlagerten MRM-Signale auf der rechten Seite zeigen, dass die Phenol-Hexcel-Säule von Santas Express in weniger als sechs Minuten eine gute Auflösung bietet. Diese Folie zeigt die Ergebnisse dieser Extraktion. Wir sehen Wiederfindungen für jeden Analyten zwischen 75 und 120 %, mit einem Gesamtdurchschnitt von etwa 96 %. Bei allen RSDs allgemein weniger als 10 %. In der Tabelle ist der für jeden Analyten verwendete interne Standard aufgeführt. Seine Wiederherstellung entspricht der Wiederherstellung und dem prozentualen RSD. Bei der nächsten Anwendung, die wir heute besprechen werden, handelt es sich um ein Steroid-Panel aus Serum. Die Arbeit wurde von Madison Kilpatrick von GPX Technologies durchgeführt und James Ross von Milliporesigma half uns, die Informationen zusammenzustellen.

Diese Methode wurde entwickelt, um verschiedene zertifizierte Referenzmaterialien von Steroiden zu analysieren. Die von Ihnen verwendeten Seren stammen aus zwei verschiedenen Quellen und es wurden NIST-Gesamtkonzentrationen bestimmt. In diesem Fall wurde die Mikroevolutionsspitze verwendet, um auf sehr niedrige Werte zu gelangen, und es folgte eine LC-MS-MS-Analyse. Auf dieser Folie werden die in der Methode verwendeten Probenvorbereitungs- und Extraktionsprozesse detailliert beschrieben. Interner Standard wird zum Serum gegeben und eine Stunde lang inkubiert. Dann wird eine Ameisensäurelösung hinzugefügt, um die Proteine ​​zu dissoziieren, und man lässt sie weitere 15 Minuten lang inkubieren. Das Sorptionsmittel in den Spitzen wurde mit einer 20 %igen Lösung aus Methanol und Wasser konditioniert.

Um eine gute Bindung zu gewährleisten, wurden bei der Bindung fünf Ansaug-Abstiegszyklen verwendet. Anschließend wurden Waschzyklen in diesen Prozess integriert. Zunächst wird nur 100 % Wasser verwendet, um die Hauptproteine ​​abzuwaschen, dann wird eine zweite Wäsche mit 20 % Methanol verwendet, um den Rest der Interferenzen zu beseitigen. Abschließend werden die interessierenden Analyten mit 5050 Methanol und Zedernnitril eluiert. Das hier dargestellte Streudiagramm zeigt also eine hervorragende Gesamtkorrelation zwischen den Konzentrationswerten, die mithilfe der DPS-Schritte ermittelt wurden, und den Werten, die mit den zertifizierten Referenzmaterialienseren bereitgestellt wurden. Das linke Diagramm zeigt die uTec-Referenzmaterialien mit den DP-X-Ergebnissen auf der y-Achse und den Ergebnissen des U-Tack-Referenzmaterials auf der x-Achse. Das rechte Diagramm ist das NIS-Materialdiagramm.

Hier haben wir nur die detaillierten Ergebnisse des NIS-Materials. Ich weiß, dass die Folien etwas überlastet sind, aber ich wollte die außergewöhnliche Empfindlichkeit und Genauigkeit hervorheben, die diese Methode bietet. Diese letzte Anwendung betrachte ich als Bonus. Das ATL B-Material, das wir demonstriert haben, wird nicht verwendet. Stattdessen wird in dieser Arbeit unser Hybrid-SPE-Material für die Analyse von THC, CBD und deren Metaboliten aus Serum verwendet. Normalerweise würde die Analyse von Cannabidiol und seinen Metaboliten getrennt von THC und seinen Metaboliten erfolgen.

Aufgrund der strukturellen Ähnlichkeiten haben wir uns jedoch für die Entwicklung einer einzigen Methode entschieden, die sowohl für die Quantifizierung von THC, CBD als auch für Metaboliten aus der Serumproteinfällung verwendet werden kann, und die Hybrid-SPE-Reinigung wurde auf dem automatischen Lipid-Liquid-Handler von Hamilton durchgeführt. Und wir nutzen die internen Standards. Proteine ​​und Lipide sind die häufigsten Matrixinterferenzen in Blut- und Serumproteinen und einige Lipide können durch Ausfällung organischer Lösungsmittel oder einen Absturz entfernt werden.

Die verbleibenden Phospholipide sind eine häufige Quelle der Ionenunterdrückung in der LCMS-Analyse, die hybriden SPE-Materialien, die er verwendet hat, um diesen Matrixeffekt zu beseitigen, und sie wirken als chemische Filterung. Im Diagramm rechts sehen wir, wie das Phospholipid (die Phosphatgruppe am Phospholipid) mit dem Zirkoniumion interagiert, um es herauszufiltern. Die folgende Probenvorbereitung wurde auf einem Hamilton Liquid Handler durchgeführt. In jede Vertiefung werden zunächst 300 Mikroliter Spike-Serum zusammen mit dem internen Standard gegeben. Anschließend führen wir die Proteinfällung durch, indem wir Kohle mit 1 % Ameisensäure zu Cedar-Nitril hinzufügen.

Die Well-Platten werden drei Minuten lang bei 1200 U/min geschüttelt, man lässt die 400 Mikroliter Überstand absetzen und überführt sie in neue Wells. Anschließend werden sie mit den Hybrid-GPX-Spitzen verarbeitet. Die Spitzen werden zunächst mit Verfahrens-Nitril mit punktueller 5 %iger Zitronensäure konditioniert, dann wird der Überstand auf die Spitzen geladen und zweimal abgesaugt und dispensiert. Dieser Schritt filtert die Phospholipide heraus, dann wird das Argument zur weiteren Verarbeitung mit dem LCMS in eine neue Vertiefung abgegeben.

Die Ergebnisse der Probenvorbereitung sehen wir auf der linken Seite als Balkendiagramm mit den Wiederfindungen, die für jeden Analyten etwa zwischen 80 und 20–120 % liegen, was gut ist. Und dann auf der rechten Seite eine Tabelle mit der Matrixbereinigung für jeden Analyten. Die Spalte mit der Überschrift „Serumextrakt“ ist das, was man nach der Fällung des faulen Proteins erhalten würde, erst dann werden die Proben mit dem Hybridmaterial weiterverarbeitet.

Der Unterschied in der Matrixbereinigung zeigt also die Verbesserung mit dem Hybrid, da Cannabidiol eine deutliche Verbesserung erzielen kann, aber bei den Metaboliten zeigt es eine signifikante Verbesserung von der 40-prozentigen Ionenunterdrückung auf 14 %, von 51 % auf 16 %. Das Interessante an der TA TC ist, dass es keine Ionenunterdrückung, sondern eine Ionenverstärkung des Analyten gibt, und auch ohne eine solche ist es eine Verbesserung von der höheren zur niedrigeren Zahl, wobei man mit dem Serumextrakt allein bereits eine Verstärkung von 207 % erhält mit der Hybridbereinigung ist auf 166 % gesunken. Und für die anderen beiden Analyten.

Auch hier sehen wir eine Verbesserung bei der Bereinigung mit dem DP X-Hybrid-SPE-Material. Um die heutige Präsentation zu überprüfen, ist die dispersive Pipettenextraktion oder DP X eine revolutionäre patentierte Technologie und bietet die Vorteile der SPE-Pipettenspitze. Das Absorptionsmittel ist lose in der Spitze enthalten und die geringen Elutionsvolumina sind ein großer Vorteil. Die HLB D px-Spitzen werden für die Extraktion einer breiten Palette von Verbindungen verwendet. Es nutzt den Binder-Washy-Loot-Prozess und sorgt für eine gute Rückgewinnung von Analyten sowohl aus Urin als auch aus der Serummatrix. Die Hybrid-DPS-Spitzen sind eine einfache und generische Möglichkeit, große Mengen an Phospholipiden zu entfernen. Sie nutzen chemische Filterinterferenzen, binden die interessierenden Van-Leuchten nicht und eignen sich hervorragend zur Reinigung der Serummatrix von Van-Leuchten. Vielen Dank, dass Sie heute beigetreten sind

Alles klar, großartig. Vielen Dank für diese wundervolle Präsentation. An diesem Punkt werden wir also mit unserer Frage-und-Antwort-Runde fortfahren. Nochmals für diejenigen unter Ihnen, die vielleicht zu spät dazugekommen sind: Sie können Ihre Fragen einsenden, indem Sie sie in das Frage-und-Antwort-Feld auf der rechten Seite Ihres Bildschirms eingeben. Ich möchte Sie auch darüber informieren, dass die in diesem Webinar besprochenen Chappelle Swift HLB-Festphasenextraktionstipps zusammen mit den vorgestellten Anwendungshinweisen bald verfügbar sein werden. Für weitere Informationen bleiben Sie also bitte auf dem Laufenden bei Milliporesigma.

Wenn Sie eine Frage oder einen Kommentar im Frage-und-Antwort-Feld auf der rechten Seite des Bildschirms hinterlassen. Wir speichern Ihren Namen und Ihre E-Mail-Adresse. Hinterlassen Sie also bitte einen Kommentar im Feld „Fragen und Antworten“, wenn Sie möchten, dass Milliporesigma Sie kontaktiert, sobald diese Technologie verfügbar ist. Hier. Nochmals vielen Dank für die tolle Präsentation. Kommen wir gleich zu den Fragen und Antworten hier. Unsere erste Frage aus dem Publikum lautet: Welchen Sample-Volumenbereich kann ich mit den Spitzen verwenden?

Das verwendete Volumen richtet sich nach dem Bettgewicht in der Spitze und wir haben verschiedene Bettgewichte im Angebot. Aber für die kleine Mikro-Elutionsspitze, die ein Bettgewicht von drei Mikro- und drei Milligramm hatte, würden wir einen Bereich von 150 bis 300 Mikroliter empfehlen. Für die größeren 1-ml-Spitzen. Sie können entweder mit 510 oder 20 Milligramm und Material geliefert werden. In unserem Produktdatenblatt finden Sie eine Tabelle, in der die von uns empfohlenen Mengen aufgeführt sind. Bei einem Fünf-Milligramm-Test würden wir Ihnen also empfehlen, weniger als 300 Mikroliter Probenvolumen zu verwenden, bei einem 10-Milligramm-Test sollten Sie weniger als 600 Mikroliter verwenden. Und mit den großen 20 Milligramm können Sie ein Probenvolumen von bis zu 800 Mikrolitern erreichen.

OK großartig. Vielen Dank. Kommen wir zur nächsten Frage: Wie können mit diesen Tipps Wiederherstellungen im Vergleich zu SPE-Patronen und 96 durchgeführt werden? Well-Platten, nun ja, Sie sollten mit einem DP x gleichwertige oder vielleicht etwas bessere Ausbeuten erzielen, dann erhalten Sie die herkömmlichen SPE- oder 96-Well-Platten. Und das hat wahrscheinlich damit zu tun, dass es auf einem Gleichgewicht beruht. Die Ausbreitung entspricht der Gleichgewichtsgeschwindigkeit, und anstelle der Durchflussrate werden nicht alle SPE-Extraktionen mit ihrer optimalen Durchflussrate durchgeführt. Wenn Sie also bei dieser Flussrate daneben liegen, werden Sie wahrscheinlich etwas weniger als die optimale Wiederherstellung erwarten.

Alles klar, großartig. Danke. Lass uns weitermachen. Es gehen noch ein paar weitere Fragen ein. Diese lautet: Wie finde ich heraus, welches Bettgewicht ich für meine Anwendung benötige?

Auch hier werden wir eine Tabelle mit Empfehlungen haben, aber beim HLB-Material beträgt die Kapazität der Materialien etwa 10 %. Wenn Sie also wissen, wie hoch Ihre erwartete Erholung ist oder wie viel Gewicht in Ihrer Probe enthalten ist, können Sie damit arbeiten. Sie möchten jedoch immer ein möglichst geringes Bettgewicht haben. Denn dann können Sie ein geringeres Elutionsvolumen verwenden, um empfindlicher zu sein. Aber auch hier beträgt die Kapazität der Polymermaterialien etwa 10 %. Und Sie würden im Allgemeinen versuchen, das Bettgewicht und die Elutionsvolumina so gering wie möglich zu halten.

Alles klar, großartig, danke. Hier ist noch eine Frage. Hier heißt es, was ist die Obergrenze des mit dieser Technik kompatiblen Probenvolumens?

Kehren wir noch einmal zu unserer ersten Frage zurück, die mit dem Probenvolumenbereich zu tun hatte: Die Obergrenze sollte wahrscheinlich bei etwa 800 Mikrolitern liegen. Und auch hier besteht ein Zusammenhang mit dem Gewicht des Bettes. Okay.

OK großartig. Danke schön. Hier noch ein paar Fragen. Hier steht, wie groß die Masse des Hlb-Polymers in der Spitze ist. Die Masse, die das Bettgewicht darstellt, das wir auflisten. Auf der Mikroillusion waren es drei Milligramm Masse in der Spitze, die für die Steroidanwendung bestimmt war. Verwenden Sie drei Milligramm in dieser mikrogalizischen Illusionsspitze, die Opioidanwendung verwendet fünf Milligramm Bettgewicht und der Hybrid, glaube ich, waren 50 Milligramm Bettgewicht in der Hybrid-Reinigungsanwendung.

OK großartig. Danke. Ich denke, wir haben hier noch Zeit für eine weitere Frage. Hier heißt es: Gibt es Schwankungen in der Pipettiergenauigkeit bei Verwendung der Mehrkanal-Roboterarmtechnologie?

Gibt es Schwankungen beim Pipettieren? Genauigkeit? Nun, ich würde sagen, wenn ich diese Frage interpretiere, ist das eine großartige Frage. Und wenn ich es richtig interpretiere, ist die Variabilität über die Spitzen hinweg sehr gering. Und das ist eines der Dinge, die wir in dieser ersten Anwendung untersucht haben: Wissen Sie, wir hatten die gleiche Probe und haben sie über alle acht Spitzen hinweg untersucht und dabei eine sehr geringe Variabilität festgestellt.

Okay, großartig, danke. Wir haben tatsächlich noch eine weitere Frage erhalten, ob Sie Zeit dafür haben. Haben Sie beispielsweise versucht, mehrere Alex-Probenchargen zu laden, könnten Sie dreimal 800 URLs der Probe laden, vorausgesetzt, dass das Sorptionsmittel diese Menge an Analyt unterstützen kann?

Ich glaube, dass du es könntest. Das ist eine wirklich interessante Frage. Das habe ich nicht gemacht, diese Arbeit. Aber das wäre ein schönes Experiment. Und das ist das Gute an diesen Tipps. Das Format ist so benutzerfreundlich, dass wir alle an das Pipettieren gewöhnt sind. Und all diese kleinen Experimente können auf dem Tisch durchgeführt werden. Sehr schnell. Eine solche Studie könnte also sehr schnell abgeschlossen werden. Danke für die Frage.

Okay, wunderbar. Vielen Dank. Ich möchte Sie alle noch einmal daran erinnern, dass die in diesem Webinar besprochenen Tipps zur schnellen HLB-Festphasenextraktion von Chapelle zusammen mit den vorgestellten Anwendungshinweisen bald veröffentlicht werden. Bleiben Sie also bitte auf dem Laufenden über Milliporesigma. Für weitere Informationen hinterlassen Sie bitte einen Kommentar im Feld „Fragen und Antworten“ auf der rechten Seite, wenn Sie möchten, dass milliporesigma Sie kontaktiert, sobald diese Technologie verfügbar ist, oder Sie können sich an uns wenden.

Hugh erhält freundlicherweise seine E-Mail-Adresse und einen QR-Code auf dem Bildschirm vor Ihnen. So können Sie weitere Informationen einholen. Damit sind wir am Ende dieses Webinars angelangt. Und ich möchte Sie noch einmal daran erinnern, dass dieses Webinar kurz nach dieser Präsentation auf Abruf verfügbar sein wird. Bitte beachten Sie Ihre E-Mail, um eine Nachricht vom Laborleiter zu erhalten, sobald dieses Video verfügbar ist.

Im Namen des Laborleiters. Ich möchte Ihnen, Kramer, für die harte Arbeit danken, die Sie in seine Präsentation gesteckt haben. Und ich möchte Ihnen allen dafür danken, dass Sie sich trotz Ihres vollen Terminkalenders die Zeit genommen haben, heute zu uns zu kommen. Nochmals vielen Dank an unseren Sponsor Milliporesigma. Ihre Unterstützung ermöglicht es dem Laborleiter, diese Webinare für unsere Leser kostenlos anzubieten. Weitere Informationen zu allen unseren bevorstehenden oder On-Demand-Webinaren oder mehr über die neuesten Tools und Technologien für das Labor finden Sie auf unserer Website unter lab manager.com. Wir hoffen, dass Sie wieder dabei sein können. Danke und einen schönen Tag.